First report of olive knot caused by Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi on olives (Olea europaea)

Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi was identified as the cause of galling on olives (Olea europaea), cv. Barnea in South Australia in May 2003 from a property at Greenfields ~10 km north of Adelaide. The bacterium was recovered from galls on 2-year-old olive trees (cv. Barnea) showing symptoms consistent with those attributed to olive knot. Following a targeted survey of cv. Barnea, further infections were located on 2 to 5-year-old trees in four other plantings in South Australia. This is the first record of olive knot in Australia

تشخيص ، پراكندگي و الگوي الكتروفورزي ويروس تريستزاي مركبات (CTV) در جنوب ايران

وجود ويروس تريستزاي مركبات (Citrus tristeza virus, CTV)، براساس علائم روشني رگبرگ در ليموترش و ساقه آبله‌اي در نارنگيهاي پيوند شده روي ليموترش ، مشاهدهء پيكره‌هاي رشته‌اي خمش‌پذير با الكترون ميكروسكپي عصارهء اين گياهان و آزمايش سرولوژيكي اليزا (DAS-ELISA) در استانهاي فارس و بوشهر به اثبات رسيد. ويروس از بافتهاي درختان نارنگي محلي پيوند شده روي ليموترش كه به طور طبيعي آلوده شده بودند، به وسيلهء دوبار رسوب دادن با پلي‌اتيلن گليكول (PEG) و سپس يك بار سانتريفوژ كردن در ستون داراي شيب چگالي مخلوط سوكروز و سولفات سزيوم، خالص‌سازي شد. آمودهء خالص‌سازي شده داراي طيف جذبي مشابه طيف جذبي نوكلئوپروتئينها بود و مشاهدهء الكترون ميكروسكپي اين آموده وجود پيكره‌هاي رشته‌اي خمش‌پذير را نشان داد. همچنين آزمايش اليزا وجود ويروس تريستزا را در اين آموده اثبات كرد. با تزريق زيرجلدي ويروس خالص شده به خرگوش ، آنتي‌سرمي عليه آن توليد شد. آنتي‌سرم بدست آمده پس از جذب با عصارهء گياه سالم در آزمايش نشت دوطرفه در آگار حاوي SDS فقط در مقابل نمونه‌هاي آلوده به CTV يك خط رسوب تشكيل داد. اين آنتي‌سرم پس از جذب با آمودهء گياه سالم و جداسازي گاماگلوبولين و تهيه آنتي‌بادي متصل به آنزيم در آزمايش DAS-ELISA مورد استفاده قرار گرفت كه در اين آزمايش ، استفاده از رقتهاي 1/900 آنتي‌بادي و 1/300 آنتي‌بادي متصل به آنزيم مناسب تشخيص داده شد. الكتروفورز پروتئين آموده‌هاي خالص‌سازي شده در ژل‌پلي‌اكريل آميد داراي دودسيل سولفات سديم (SDS-PAGE) در مورد تمام جدايه‌ها دو نوع پروتئين نشان داد. يكي از پروتئينها با وزن مولكولي 35500-36300 دالتون در عصارهء گياه سالم نيز مشاهده مي‌شد ولي پروتئيني با وزن مولكولي 22500-23000 دالتون فقط در عصارهء گياهان آلوده وجود داشت . بررسي پوست تنه در قسمت پايه، پوست تنه در قسمت پيوندك ، پوست شاخه‌هاي دوساله، پوست شاخه‌هاي جديد، دمبرگ و آلبيدو ميوهء 11 اصله نارنگي پيوند شده روي ليموترش با روش اليزا نشان داد كه پوست تنه در قسمت پيوندك و پوست شاخه‌هاي دوساله بيشترين مقدار ويروس را دارا هستند. پراكندگي CTV در مناطق مهم مركبات كاري استان‌هاي فارس و بوشهر، بر روي گونه‌ها و رقمهاي مختلف مركبات با استفاده از روش اليزا مورد بررسي قرار گرفت . از 646 درخت مورد آزمايش 242 درخت آلوده تشخيص داده شد. در ميان مناطق مختلف جهرم، خفر، كازرون، فسارود و جنت‌شهر داراب از استان فارس و دالكي، رودفارياب ، خائيز و جم از استان بوشهر و در ميان ارقام مختلف پرتقال، ليموشيرين، ليموترش ، نارنگي محلي، آنشو، نارنگي خاري و نارنگي كلمانتين آلوده تشخيص داده شد. آزمايشهاي انجام شده نشان داد پراكنش CTV در مناطق مختلف و روي رقمهاي مختلف مركبات جنوب ايران نسبتا وسيع است . وجود درختان ليموترش آلوده در نقاط دورافتاده نشان مي‌دهد كه CTV نه تنها احتمالا در سالهاي اخير همراه با رقمهاي جديد مركبات وارد منطقه شده، بلكه ممكن است از زمانهاي خيلي دور نيز در منطقه وجود داشته است . همچنين آلودگي ليموترش امكان وجود ناقل ويروس در منطقهء جنوب كشور را مطرح مي‌سازد. بنابراين آنچه كه لازم است از اين پس مورد مطالعه قرار گيرد علاوه بر پيگيري نقش ناقلين احتمالي، ميزان خسارت ناشي از CTV در درختان مركبات و نوع سويه‌هايي است كه در منطقهء جنوب وجود دارد.

ردیابی بیماری تریستزای مرکبات

در این تحقیق سلامت ارقام مهم تجاری منبع پیوندک و ارقام وارداتی در ایستگاه های مرکبات رامسر(60 مورد)، خرم آباد تنکابن(35 مورد)،  کترا(حدود 300 مورد) و تمامی نهالهای مادری وارداتی از کشور فرانسه از نظر بیماری تریستزا با روش ایمیونوپرینتینگ و الایزا مورد بررسی قرار گرفتند. بدین صورت که در فصل گل، جمع آوری گلهای بسته از چهار جانب درختان مورد نظر انجام شد. گلبرگهای گل جدا شده و لکه گذاری کاغذهای نیتروسلولز به منظور انجام آزمون ایمیونوپرینتینگ با استفاده از برش مقطع تخمدان صورت گرفت. دو خانه از میان جدول ترسیم شده روی کاغذها برای هر نمونه در نظر گرفته شده و در هر یک از دو خانه 4-3 لکه ایجاد شد. همچنین دو خانه برای شاهد مثبت و یک خانه برای شاهد منفی در نظر گرفته شد. این کاغذها  در شرایط آزمایشگاه به مدت دو ساعت در معرض محلول 1% آلبومین گاوی قرار گرفته و پس از سه بار شستشو، سه ساعث در آنتی بادی نشاندار ویروس مربوطه غوطه ور و مجددا شسته شدند. مدتی پس ازاضافه کردن سوبسترای NBT-BCIP  بقایای رنگ رسوب ارغوانی در ناحیه آوندی نقوش مربوط به شاهد مثبت و نمونه های آلوده به ویروس ظاهر شد و در نمونه های سالم واکنش تغییر رنگ مشاهده نشد. آزمون الایزا برای تائید موارد مشکوک در ایمیونوپرینتینگ یا به عنوان روش جایگزین مورد استفاده قرار گرفت.

     پس ازاضافه کردن سوبسترای NBT-BCIP  بقایای رنگ رسوب ارغوانی در ناحیه آوندی نقوش مربوط به شاهد مثبت( لایم آلوده موجود در گلخانه موسسه) ظاهر شد و در نمونه های سالم واکنش تغییر رنگ مشاهده نشد.نتایج مشابه در آزمون الایزا حاصل شد. در بین درختان مادری و نهالهای وارداتی از فرانسه تست شده با آنتی بادی بیوربا هیچ کدام به ویروس تریستزای مرکبات آلوده نبودند. در ضمن  با بررسی­های به عمل آمده مشخص شد که می توان از تخمدان گل در ردیابی ویروس تریستزای مرکبات در آزمون ایمیونوپرینتینگ و الایزا  استفاده نمود.

                                           

خالص‌سازي، توليد آنتي‌سرم و توسعه يك سيستم بيوتكنولوژيكي حساس به منظور تشخيص دقيق و سريع ويروس تريست

يك گياه مركبات با علائم مشكوك به ويروس تريستزا در باغات مهدشت ساري انتخاب و وجود ويروس مزبور در آن به روش Indexing به اثبات رسيد. گياه مزبوربعنوان منبع اوليه ويروس انتخاب و از آن پيوندك آلوده تهيه گرديد. بمنظور تكثير ويروس ، پيوندكهاي مزبور به 150 اصله نهال ليمو آب پيوند زده شد و نهالها در گلخانه نگهداري گرديدند، تك‌تك نهالها از نظر بيماريهاي ويروسي و شبه ويروسي ديگر از جمله Exocortis، پسورز و نقش حلقوي به روش متداول Indexing مورد آزمايش قرار گرفتند و معلوم شد كه نهالهاي مورد نظر فقط آلوده به ويروس تريستزا هستند و در گياهان محكي كه مورد استفاده قرار گرفته بودند هيچگونه علائم آلودگي ديگر مشاهده نگرديد، در آينده بافت آلوده نهالهاي پيوند زده شده، بمنظور خالص‌سازي ويروس مورد استفاده قرار خواهند گرفت .