Phyllody caused by Aster Yellows Phytoplasma on a goldenrod

بررسي وجود فيتوپلاسما در حشرات جمع آوري شده از باغ هاي ليموترش مبتلا به بيماري جاروك

صيام پور مجيد,ايزدپناه كرامت اله*,افشاري فر عليرضا,صالحي محمد,تقي زاده محمد

عليرغم خسارتهاي شديد بيماري جاروك ليموترش و گسترش طبيعي آن در باغ هاي مناطق آلوده، هنوز ناقل آن شناسايي نشده است. هدف كلي اين تحقيق، بررسي حشرات مكنده جمع آوري شده از باغهاي ليموترش مبتلا به اين بيماري به منظور شناسايي ناقلين احتمالي آن مي باشد. به اين منظور در فصول مختلف سال هاي 82 و 83، حشران مكنده از باغ هاي آلوده استان هاي هرمزگان و كرمان به وسيله تور حشره گيري جمع آوري شدند. به منظور رديابي و شناسايي فيتوپلاسما در بدن حشرات جمع آوري شده از روش PCR دو مرحله اي و سپس آناليز RFLP يا تعيين ترادف قطعه تكثير شده استفاده شد. نتايج اين بررسي نشان داد كه ژن آر.ان.اي ريبوزومي 16S فيتوپلاسماي همراه با جاروك ليموترش در بدن زنجرك هاي Hishimonus phycitis, Recilia schmistgeni و Idioscopus clypealis و پسيل مركبات (Diaphorina Citri) قابل رديابي است. زنجرك H. phycitis  و پسيل D. citri تنها حشرات مكنده اي بودند كه از درختان ليموترش مناطق آلوده جمع آوري شدند. بررسي هاي دقيق تر بعدي پايداري فيتوپلاسماي رديابي شده را در بدن زنجرك H. phycitis و پسيل D. citri تاييد نمود. از قسمت سر، غدد بزاقي و بزاق آزاد شده زنجرك H. phycitis به يك محلول قندي قسمتي از ژن آر.ان.اي ريبوزومي 16S كه با ژن مزبور در فيتوپلاسماي جاروك ليموترش شبيه بود رديابي گرديد.

تعيين پراكندگي، ميزان و شدت آلودگي بيماري جاروك در مزارع يونجه استان سيستان و بلوچستان

سيدعليرضا اسمعيل زاده حسيني، سيدرضا فاني، كاظم دشتكيان، كاظم فرهمند و محمدصالحي ابرقويي

بخش هاي تحقيقات آفات و بيماريهاي گياهي مراكز تحقيقات كشاورزي و منابع طبيعي استانهاي يزد و فارس [e-mail]

 

جاروك يونجه يكي از بيماريهاي مهم و داراي اهميت اقتصادي در پاره‌اي از مناطق كشور مي‌باشد. طي سالهاي 82 لغايت 84 از مناطق عمده يونجه كاري استان سيستان و بلوچستان بازديد و نسبت به تعيين پراكندگي، درصد و شدت آلودگي جاروك اقدام شد. براي اين كار در هر منطقه 5 مزرعه به طور تصادفي انتخاب و در موقع برداشت محصول در چين پنجم هر سال در هر 500 متر زمين 5 كادر 5/0 ×5/0 متري با حركت زيگزاگ در امتداد اقطار و به طور تصادفي انداخته شد . آلودگي بوته‌ها بر اساس علايم مشخص بيماري و آزمايش اليزا با استفاده از آنتي بادي چند همسانه‌اي جاروك يونجه تعيين شد. محاسبه درصد آلودگي بر اساس تعداد  بوته‌هاي آلوده به تعداد كل بوته شمارش شده در هر كادر انجام شد. همچنين همزمان با محاسبه درصد آلودگي، شدت آلودگي بوته‌ها بر اساس خصوصيات ظاهري گياه به درجات آلودگي كم تا خيلي شديد تعيين شد. بر اساس نتايج اين تحقيق آلودگي در تمام شهرستانهاي استان سيستان و بلوچستان مشاهده شد. بيشترين درصد آلودگي جاروك در استان به ترتيب در شهرستان سرباز ( تا 7/28 درصد)، زابل (تا 5/14 درصد)، نيكشهر (تا 9/13 درصد)، سراوان (تا 1/12 درصد)، ايرانشهر تا (4/9 درصد)، خاش (تا 9/7 درصد)، زاهدان (تا 8/7 درصد) و چابهار (تا 16/6 درصد ) بود. شدت آلودگي در اكثر مناطق مورد بررسي تفاوت معني دار نداشت ولي بيشترين شدت آلودگي در شهرستان زاهدان مشاهده شد.

 

 

Geographical distribution, infection rate and severity of alfalfa witches^, broom disease in alfalfa fields in Sistan -va- Baluchestan province

 

S. A. Esmailzadeh Hosseini, S. R. Fani, K. Dashtakian, K. Farahmand and M. Salehi

Plant Pests and Diseases Research Depts, Yazd and Fars Agricultural and Natural Resources Research Centers [e-mail]

 

Alfalfa witches^, broom(AWB) is one of the most important alfalfa disease in Iran . To evaluate the status of AWB, the alfalfa growing regions of Sistan -va- Baluchestan province were surveyed between 2003-2005 and geographical distribution , infection rate and severity of AWB were assessed. For sampling, five field were selected randomly  and sampling conducted in fifth cutting. In each field sampling were carried out  randomly at five points on a diagonal transect in a 500 m² field using 0.5-m quadrate. Infected samples were diagnosed based on distinct morphological symptoms(virescence, phyllody, flower sterility severely stunting, erect and excessively branched and yellowish stunting) and ELISA using polyclonal antiserum. The result indicated that AWB is widespread all over the Sistan-va- Baluchestan province. Maximum infection percent of AWB were observed in Sarbaz(up to 28.7%), Zabol(up to 14.5%), Nikshahr(up to 13.9%), Saravan(up to 12.1%),Iranshahr(up to 9.4%), Kash(up to 7.9%), Zahedan(up to 7.8%) & Chabahar(up to 6.16%). Disease severity  were not difference significantly but the most disease severity were observed in Zahedan.

 

alfalfa witches’ broom

موقعيت تاکسونوميکي فيتوپلاسماهاي همراه با جاروك يونجه در استانهاي فارس ويزد و معرفي فيتوپلاسماي همر

محمد صالحي¹ و کرامت اله ايزدپناه²

1- بخش تحقيقات و آفات و بيماريهاي گياهي، مرکز تحقيقات کشاورزي و منابع طبيعي فارس 2- بخش گياهپزشکي دانشکده کشاورزي دانشگاه شيراز

 

جاروك يونجه يك بيماري مهم و اقتصادي در بسياري از استانهاي ايران مي باشد. در تحقيق حاضر ويژگي هاي فيتوپلاسماهاي همراه با جاروك يونجه جويم و مبارك اباد (استان فارس) و ابركوه (استان يزد) تعيين گرديد و فيتوپلاسماي همراه با جاروك يونجه جويم به  عنوان يك  گونه جديد(Ca. Phytoplasma species) در گروه جاروك بادام زميني ( peanut witches’ broom, 16SrII) معرفي مي شود. محصول PCR با  جفت آغازگر  P1/P7(  1800جفت باز  از دي. ان. اي ريبوزومي ) در  فيتوپلاسماهاي همراه با جاروك يونجه جويم و مبارك اباد) وابركوه در پلاسميدpT57R/T و در سويه Escherichia coli DH5α همسانه سازي و تعيين ترادف گرديد. از ترادفهاي ژن ار. ان. اي ريبوزومي S16و   ناحيه جداكننده  (spacer region , SR ) ميان ژنهاي S16 وS  23 براي آناليزهاي مولكولي  استفاده شد. جستجو با BLAST و آناليزهاي تبارزايي و جايگاههاي برشي نشان داد كه  فيتوپلاسما هاي همراه با جاروك يونجه  جويم ، مبارك اباد وابركوه به گروه جاروك بادام زميني تعلق دارند. بر اساس آناليزهاي فوق اين فيتوپلاسماها از يكديگر قابل تشخيص نبودند و ارتباط نزديكي با فيتوپلاسماي عامل جاروك ليموترش داشتند اما از لحاظ علائم بيماري در پروانش متفاوت بودند. فيتوپلاسماي همراه با جاروك يونجه جويم و فيتوپلاسماي همراه با جاروك ليموترش(Ca. Phytoplasma aurantifolia ) علي رغم داشتن  بيش از 97.5% تشابه نوکلئوتيدي با  معيارهايي مانند عدم انتقال  Ca. Phytoplasma aurantifolia  با زنجرك Orosius albicinctus ، ناقل فيتوپلاسماي همراه با جاروك يونجه،  اختلاف در دامنه ميزباني در بين گياهان علفي و علائم بيماري در ميزبانهاي مشترك، واكنش منفي Ca. Phytoplasma aurantifolia در مقابل آنتي سرم فيتوپلاسماي همراه با جاروك يونجه جويم واختلاف از نظر جايگاههاي برشي در ناحيهSR  از يكديگر قابل  تشخيص بودند.  بر اساس اين نتايج و قوانين مربوط به نامگذاري پروكاريوتهاي غير قابل كشت و معيارهاي ارائه شده توسط  تيم بين المللي   گروهبندي  فيتوپلاسماها، فيتوپلاسماي همراه با جاروك يونجه جويم يك گونه جديد در گروه جاروك بادام زميني مي باشد.

 

 

Taxonomic status of alfalfa witches’ broom associated phytoplasmas in Fars and Yazd Provinces and introduction of Juyom associated phytoplasma as a new Ca. Phytoplasma species

 

M. Salehi¹ and K. Izadpanah²

1- Plant Pests and DiseasesResearch Dept. Fars Agricultural and Natural Resources Research Center; 2- Dept. of Plant Protection, College of Agriculture, Shiraz University

 

Alfalfa witches’ broom (AlfWB)  is an economically important disease in several provinces of Iran. In the present work phytoplasmas associated with Juyom, Mobarakabad (Fars Province)and Abarque (Yazd Province) AlfWB (JAlfWB, MAlfWB and AAlfWB, respectively) were characterized and JAlfWB is reported as a new Ca. Phytoplasma species in the peanut witches' broom , 16SrII phytoplasma group. P1/P7 primed PCR products (1800bp) of ribosomal DNA (rDNA) were ligated onto pT57R/t vector , cloned into Escherichia coli DH5α and sequenced. 16S rDNA and 16S- 23S rDNA spacer region (SR)  sequences were used for molecular analyses. Phylogenetic and putative restriction site analyses  of 16SrDNA and SR sequences placed  JAlfWB, MAlfWB and AAlfWB phytoplasmas in the 16SrII phytoplasma group. As members of 16SrII group, these phytoplasmas were indistinguishable, although disease symptoms in periwinkle could diffrrentiate them. Although JAlfWB shared more than 97.5% homology with lime witches broom phytoplasma (Ca. phytoplasma aurantifolia) at nucleotide level , clear differences were observed between these two phytoplasmas. Ca. phytoplasma aurantifolia was not transmitted by Orosius albicinctus, the vector of JAlfWB phytoplasma, and the two phytoplasmas induced different symptoms in common hosts. Ca. phytoplasma aurantifolia does not react with antiserum prepared against JAlfWB phytoplasma. Based on these results and according to the rules for the description of putative taxa  of uncultured bacteria and phytoplasmas, Spiroplasma working team of the International Research Program of Comparative Mycoplasmology (IRPCM), GAlfWB phytoplasma is qualifiedas a new Ca. Phytoplasma species in the 16SrII phytoplasma group.

Lime witches' broom phytoplasma

بررسي وجود فيتو پلاسما در حشرات جمع آوري شده از باغ هاي ليمو ترش مبتلا به بيماري جاروك

     مجيد صيام پور ، كرامت اله ايزدپناه ، عليرضا افشاريفر ، محمد صالحي ، محمد تقي زاده  

عليرغم خسارتهاي شديد بيماري جاروك ليموترش و گسترش طبيعي آن در باغ هاي مناطق آلوده، هنوز ناقل آن شناسايي نشده است. هدف كلي اين تحقيق، بررسي حشرات مكنده جمع آوري شده از باغهاي ليموترش مبتلا به اين بيماري به منظور شناسايي ناقلين احتمالي آن مي باشد. به اين منظور در فصول مختلف سال هاي 82 و 83، حشران مكنده از باغ هاي آلوده استان هاي هرمزگان و كرمان به وسيله تور حشره گيري جمع آوري شدند. به منظور رديابي و شناسايي فيتوپلاسما در بدن حشرات جمع آوري شده از روش PCR دو مرحله اي و سپس آناليز RFLP يا تعيين ترادف قطعه تكثير شده استفاده شد. نتايج اين بررسي نشان داد كه ژن آر.ان.اي ريبوزومي 16S فيتوپلاسماي همراه با جاروك ليموترش در بدن زنجرك هاي Hishimonus phycitis، Recilia schmistgeni و Idioscopus clypealis و پسيل مركبات (Diaphorina Citri) قابل رديابي است. زنجرك H. phycitis و پسيل D. citri تنها حشرات مكنده اي بودند كه از درختان ليموترش مناطق آلوده جمع آوري شدند. بررسي هاي دقيق تر بعدي پايداري فيتوپلاسماي رديابي شده را در بدن زنجرك H. phycitis و پسيل D. citri تاييد نمود. از قسمت سر، غدد بزاقي و بزاق آزاد شده زنجرك H. phycitis به يك محلول قندي قسمتي از ژن آر.ان.اي ريبوزومي 16S كه با ژن مزبور در فيتوپلاسماي جاروك ليموترش شبيه بود رديابي گرديد.

خصوصیات فیتوپلاسماها

۱-جزء پروکاریوت ها

۲-کوچک و بدون دیواره سلولی

۳-محدود به آوند های آبکش

۴-معمولا با مکروسکوپ الکترونی قابل مشاهده هستند

۵-بوسیله تقسیم دوتایی تکثیر میشوند

۶-بوسیله حشرات(معمولا زنجره ها منتقل میگردند

 

فیتوپلاسما 3

TWISTING

DISTORTION

علامت بیماریهیا فیتوپلاسمایی 1

VIRESCENCE

BROOMING